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　　【關(guān)鍵詞】 莪術(shù) 吉馬酮 高效液相色譜法

　　中藥莪術(shù)是姜科植物蓬莪術(shù)Curcuma phaeocaulis Valeton，廣西莪術(shù)Curcuma kw angsiensis S. G. Lee C. F. Liang和溫郁金Curcuma wenyujin Y. H. Chen et C. Ling的根狀莖，具抗腫瘤、抗菌、行氣破血、消積止痛等功效，主治積滯脹痛、血腹痛、肝脾腫大、血滯經(jīng)閉、早期宮頸癌［1］。首載于《雷公炮炙論》。主要產(chǎn)于四川、福建、浙江、廣西等地。其中廣西莪術(shù)Curcuma kw angsiensis S. G. Lee C. F. Liang又名桂莪術(shù)，主要分布于廣西桂中南地區(qū)。莪術(shù)中含揮發(fā)油、姜黃素等成分，揮發(fā)油為其抗腫瘤有效成分，姜黃素為其降血脂、抗氧化、抗炎的主要有效成分。研究中發(fā)現(xiàn)，莪術(shù)油中的吉馬酮含量較高，且對癌細(xì)胞具有一定的抑制作用［2］。為了能更好地控制廣西莪術(shù)的質(zhì)量，現(xiàn)用HPLC法對廣西境內(nèi)不同產(chǎn)地的廣西莪術(shù)進(jìn)行含量測定，研究比較其含量差異。

　　1  儀器與試藥

　　美國Agilent1100Series型高效液相色譜儀:四元泵，在線脫氣機(jī)，自動進(jìn)樣器(G1313A)，柱溫箱，可變波長檢測器。Simplicity185型超純水系統(tǒng)(MILLIPORE)。KQ-200VDB型雙頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。LG-16W型離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）。甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為高純水。吉馬酮對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號111665-200401)。藥材采自各個(gè)產(chǎn)地，經(jīng)本校藥用植物教研室王建老師鑒定為姜科植物廣西莪術(shù)Curcuma kw angsiensis S. G. Lee C. F. Liang。

　　2  方法與結(jié)果

　　2.1  色譜條件日本島津公司Shim-pack CLC-ODS柱(6.0 mmID×15 cm，5 μm)；流動相為乙腈-水(60∶40)，流速：1 ml/min，柱溫：35℃，檢測波長215 nm。進(jìn)樣量5 μl。理論塔板數(shù)以吉馬酮峰計(jì)應(yīng)不低于6 000。在此色譜條件下，吉馬酮對照品和桂莪術(shù)樣品的HPLC色譜圖分別見圖1～2。

　　2.2  對照品溶液的配制精密稱取吉馬酮對照品11.65 mg，置10 ml量瓶中，加60%乙腈溶解并定容至刻度，即得吉馬酮對照品儲備液。 分別精密量取5 ，25，50，250，500 μl對照品儲備液，置1 ml量瓶中，用60%乙腈定容至刻度，即得不同濃度的吉馬酮對照品溶液。

　　2.3  供試樣品溶液的制備取切碎的廣西莪術(shù)鮮根莖5 g，精密稱定，精密加入甲醇25 ml，稱定重量，回流提取1 h，放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0.45 μm濾膜濾過，即得。

　　2.4  線性關(guān)系的考察將“2.2”項(xiàng)下5個(gè)濃度的對照品溶液注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量5 μl，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積A對樣品濃度C(μg/ml)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線：A =15.93C-20.92，r=0.999 92，其線性范圍為5.825～582.5 μg/ml。

　　圖1  吉馬酮對照品HPLC色譜圖（略）

　　圖2  桂莪術(shù)樣品（桂平金田）HPLC色譜圖（略）

　　2.5  精密度實(shí)驗(yàn)取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣5 μl/次，對峰面積進(jìn)行考察，峰面積的RSD為0.12%，說明儀器精密度很好。

　　2.6  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一份供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12，24 h不同時(shí)間間隔點(diǎn)進(jìn)樣分析，對峰面積進(jìn)行考察，峰面積的RSD為1.17%，結(jié)果表明樣品溶液在24 h穩(wěn)定。

　　2.7  重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一莪術(shù)樣品6份，切碎，混勻，精密稱定，分別按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下分別測定其色譜圖，并計(jì)算其吉馬酮的含量,結(jié)果吉馬酮的平均含量為4.23%,RSD為1.7%(n=6),表明該法重復(fù)性較好。

　　2.8  加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取吉馬酮對照品10.9 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密稱取已知吉馬酮含量的切碎的廣西莪術(shù)鮮根莖6份各2.5 g，各分別精密加入甲醇20 ml及上述對照品溶液5 ml，其余操作同“2.3”項(xiàng)中的方法，結(jié)果表明吉馬酮平均回收率為101.41%，RSD=2.82%(n=6)，說明本方法準(zhǔn)確度較好。數(shù)據(jù)見表1。

　　表1  加樣回收率實(shí)驗(yàn)（略）

　　2.9  樣品測定取不同產(chǎn)地的莪術(shù)鮮根莖樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備各供試品溶液。取供試液5 μl，注入高效液相色譜儀，按所設(shè)定的HPLC條件進(jìn)行測定，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算各樣品中吉馬酮的含量，每個(gè)產(chǎn)地取3份樣品求平均值。結(jié)果見表2。

　　表2  不同產(chǎn)地吉馬酮含量測定結(jié)果比較（略）

　　3  討論

　　廣西自古以來就是桂莪術(shù)的道地產(chǎn)地，自20世紀(jì)60年代野生變家種以來，栽培歷史較久，栽培經(jīng)驗(yàn)豐富。在國家大力推廣“三農(nóng)”政策的今天，發(fā)展當(dāng)?shù)貎?yōu)勢產(chǎn)業(yè)，開辟大量的桂莪術(shù)種植基地，成了農(nóng)民發(fā)家致富的一條捷徑。欽州市桂莪術(shù)種植面積約2 300 ha，占全廣西莪術(shù)種植面積的50%以上，其中主要分布在欽北區(qū)、靈山陸屋和青塘鎮(zhèn)。靈山陸屋鎮(zhèn)已自發(fā)形成莪術(shù)集散地，每年收獲季節(jié)有大量全國各地客商前來聯(lián)系業(yè)務(wù)。有3 325戶種植農(nóng)戶，種植面積達(dá)483.5 ha。在玉林、興業(yè)、南寧、貴港也有廣泛種植。

　　本實(shí)驗(yàn)考察了不同提取溶劑及不同提取方法、提取時(shí)間、溶劑量等影響因素對提取率的影響，確定了本實(shí)驗(yàn)所采用的5倍量甲醇為溶劑，回流提取30 min的最佳提取方法。

　　從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)上看,不同產(chǎn)地的桂莪術(shù)中吉馬酮的含量有明顯差異。其中福綿、港江、興業(yè)三個(gè)產(chǎn)地吉馬酮含量最高，金田、陸屋和成均吉馬酮含量較高，三隆含量最低。由此得知，玉林市內(nèi)種植的桂莪術(shù)吉馬酮含量普遍高，建議應(yīng)當(dāng)大力推廣種植，增加種植面積。欽州市種植面積最大，但吉馬酮含量較玉林市低。

　　本實(shí)驗(yàn)建立了RP-HPLC法直接測定桂莪術(shù)中吉馬酮含量的方法，通過方法學(xué)考察表明,該定量檢測方法結(jié)果可靠，為桂莪術(shù)中吉馬酮的分析研究提供了可信的檢測手段。

　　【參考文獻(xiàn)】
　　［1］ 國家藥典委員會. 中國藥典,Ⅰ部［S］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：194.

　　［2］ 王 炎，王慕鄒. 莪術(shù)的質(zhì)量研究［J］．藥學(xué)學(xué)報(bào)，2001，36(11)：849